人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞(HK-2)
細胞介紹：
該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生 包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產(chǎn)生的再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，后 將PA317產(chǎn)生的顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2 細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。

 
細胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1. 準備角化培養(yǎng)基（Defined K-SFM);角化因子（500X);添 力口 5ng/mLEGF;雙抗1%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1.復(fù)蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤雔〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞(HK-2)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3.細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿要消毒滅菌后方能丟棄瓶中。

 
細胞特性：
1)來源：正常腎
2)形態(tài)：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞(HK-2)運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細胞

，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供使用。